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體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀
體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀
一、 儀器介紹
實驗目的：
本試驗檢測受試物是否引起培養的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性
實驗概述：
在加入和不加入代謝活化系統的條件下,使培養的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。
大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數目畸變。
應用范圍
應用于科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域
二、試驗流程
1）細胞培養
選擇合適細胞系，在含血清培養基中培養至對數生長期。
2）受試物處理
設置多個濃度組(需包括細胞毒性評估，如50%生長抑制濃度)
陽性對照
陰性對照(溶劑對照)
3.）代謝活化系統（S9混合液）
模擬體內代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9)
4.）采樣時間
短期處理:1個細胞周期(通常24小時，含或不含S9)
長期處理:覆蓋多個細胞周期(如48小時)
5）染色體制備
秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細胞。
低滲處理(KCI溶液)使細胞膨脹。
固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片，Giemsa染色。
6）鏡檢分析
顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。
三、儀器與試劑
關鍵儀器：
培養箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統)
染色體自動掃描儀(可選)
主要試劑:
細胞培養基、胎牛血清。
秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。
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