技術(shù)文章
體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)儀
體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)儀
一、 儀器介紹
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
本試驗(yàn)檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞染色體畸變,以評價(jià)受試物致突變的可能性
實(shí)驗(yàn)概述：
在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細(xì)胞停止在中期分裂相,隨后收獲細(xì)胞,制片,染色,分析染色體畸變。
大部分的致突變劑導(dǎo)致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預(yù)示著有染色體數(shù)目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。
應(yīng)用范圍
應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個(gè)領(lǐng)域
二、試驗(yàn)流程
1）細(xì)胞培養(yǎng)
選擇合適細(xì)胞系，在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。
2）受試物處理
設(shè)置多個(gè)濃度組(需包括細(xì)胞毒性評估，如50%生長抑制濃度)
陽性對照
陰性對照(溶劑對照)
3.）代謝活化系統(tǒng)（S9混合液）
模擬體內(nèi)代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導(dǎo)的大鼠肝S9)
4.）采樣時(shí)間
短期處理:1個(gè)細(xì)胞周期(通常24小時(shí)，含或不含S9)
長期處理:覆蓋多個(gè)細(xì)胞周期(如48小時(shí))
5）染色體制備
秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細(xì)胞。
低滲處理(KCI溶液)使細(xì)胞膨脹。
固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片，Giemsa染色。
6）鏡檢分析
顯微鏡下觀察至少200個(gè)中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。
三、儀器與試劑
關(guān)鍵儀器：
培養(yǎng)箱、生物安全柜、離心機(jī)、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統(tǒng))
染色體自動掃描儀(可選)
主要試劑:
細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清。
秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。
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